EKSTRAKSI VITAMIN B12
Ekstraksi vitamin B12
mengikuti metode Heudi et al. (2005).
Sebanyak 15 g tempe segar yang telah dihaluskan dicampur 50 ml buffer asetat 50
mM (pH 4) pada botol gelap lalu dihomogenkan dengan stirer selama 3 menit pada
kecepatan 1200 rpm. Suspensi yang telah homogen ditambah dengan 0.5 g enzyplex
(Westmont Pharmaceutical) dan 1 ml kalium sianida 1% (Merck, 104965) lalu
distirer kembali 10 menit dengan kecepatan 1200 rpm. Selanjutnya, suspensi
diinkubasi pada waterbath (GFL 1086)
dengan suhu 37 ˚C dengan kecepatan 40 rpm selama 30 menit, lalu dipindahkan
pada waterbath (BS21) 100 ˚C dengan
kecepatan 40 rpm selama 30 menit. Suspensi yang telah mencapai suhu ruang
ditambah buffer asetat 50 mM (pH 4) hingga volume 100 ml, dihomogenkan dengan
stirer lalu disaring dengan menggunakan kertas saring. Hasil penyaringan
dipindahkan ke dalam botol gelap baru dan disimpan pada suhu 4 ˚C sampai
digunakan kembali untuk analisis kadar vitamin B12 menggunakan HPLC.
Sebelum dilakukan HPLC hasil disentrifugasi 10000 rpm selama 10 menit, kemudian
difilter dengan milipore 0,2 µm.
Komentar
Posting Komentar